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    MKBio TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂
    目录号 MF0403-100ML 售价 450.00元
    规格 100ml 运输温度 冰袋
    其他名称 总RNA提取试剂 保存温度 2-8℃保存
    CAS号 N/A 有效期 至少一年
    应用 总RNA提取 订购数量
    产品简介:

    TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂


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    产品关键词:

    TRIzol Reagent;酚氯仿抽提;RNase-free H2O; Total RNA 总RNA提??;RNAlater;Invitrogen 15596026;


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格            

    价格(元)  

    TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂   

    MF0403-100ML    

    100ml

    450


    产品描述

    TRIzol Reagent是一种即用型且操作迅捷的总RNA抽提试剂,适用样本广泛,包括人、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本。TRIzol Reagent是一种含酚、异硫氰酸胍和其他专利成分的单相溶液,有利于抽提分子量大小不一的各种RNA类型。TRIzol Reagent能够良好的维持RNA完整性,因能高效抑制样本匀浆过程中细胞破损和细胞组分溶解时释放的RNase活性。TRIzol Reagent能够同时处理大量样本,且以优化的方式一步法提取RNA,整个过程可在一小时内完成。


    TRIzol Reagent分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,适用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A)+筛选、体外翻译、RNase?;し治龊头肿涌寺〉认掠问笛?。


    保存与运输方法

    保存:2-8℃保存,至少一年有效。

    运输:冰袋运输。


    注意事项

    1)   所有离心管、枪头以及相关溶液都必须无RNase污染。对于塑料制品、玻璃和金属器皿、实验仪器等可使用懋康生物的固相RNase清除剂去除RNase(货号:MF0406-100ML),或者用含0.01% DEPC(货号:MS5513-10ML)的去离子水浸泡过夜,之后高压灭菌、烘干。对于实验溶液可使用懋康生物的液相RNase清除剂(货号:MF0407-1.5ML)来处理或用DEPC处理水(比如:MF0404-500ML)来配制。

    2)   对新鲜组织或细胞样本的抽提效果通常优于冻存的组织或细胞,由于组织或细胞冻融过程中可能存在一些RNase释放出来并酶切样品。若是不能及时抽提RNA,推荐先加入适量TRIzol Reagent,之后裂解样品后再冻存。

    3)   TRIzol Reagent含有毒物质,请在操作过程中注意好防护工作,戴好手套和护眼罩,避免皮肤接触。在通风橱内完成操作,避免呼吸道吸入。

    4)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

    1.  需要自行准备的材料

    水浴锅或微量恒温仪(Heat block)

    异丙醇

    75%乙醇

    含0.5% SDS的RNase-free水或RNase-free水或DEPC处理水

    【可选】RNase-free的糖原(核酸助沉剂)


    2.  样本要求

    【重要】:样本收集后立即进行RNA分离,或样本收集后立即冻存样本并保存在-80℃或液氮中直至RNA抽提。

    样本类型

    每mlTRIzol Reagent处理的起始样本量

    组织(新鲜组织或保存在RNAlater等稳定液内的组织)

    50~100mg组织

    单层生长的细胞

    1×105~1×107单细胞层(35mm培养皿,10cm2)

    悬浮生长的细胞

    5-10×106个细胞(动植物或酵母来源)或1×107个  

    细胞(细菌来源)

     

    3. 样本准备与分相

    3.1 根据起始材料用TRIzol Reagent裂解和匀浆样本。

    ◇组织样本

    按比例每50~100mg 组织加1ml TRIzol Reagent,之后用合适的方法进行匀浆。通常用50~100mg组织即可获得足量的RNA,满足绝大多数下游实验。加入过量组织或过少TRIzol都容易导致RNA提取失败。

    a)对于研钵研磨:将液氮冻存组织,放到研钵中研磨成粉末,之后加入1ml TRIzol,继续研磨至组织完全裂解【研磨要迅速,最好不要超过1min】。b)对于玻璃匀浆器匀浆:加入1ml TRIzol上下手动匀浆组织10~15次。c)对于机械匀浆器:将组织放入塑料管内,将塑料管置于冰浴烧杯内,加入1ml TRIzol,将分散器头垂直插入管内与组织直接接触,设置转速12,000~20,000 rpm,上下移动试管10~20次,直至组织完全打散,无明显可见大块即可。

    ◇单层生长的细胞

    吸尽培养基,之后往35mm培养皿(10cm2)内加入1ml TRIzol Reagent,晃动3~5次,再用移液枪上下吹打3~5次,使其充分裂解?!景凑?0cm2培养面积加入1ml TRIzol加量。比如:六孔板每孔加入1ml TRIzol,12孔板每孔加0.5ml TRIzol】

    ◇  悬浮生长的细胞

    离心收集细胞,吸尽上清,每5-10×106个细胞(动植物或酵母来源)或1×107个细胞(细菌来源)加入1ml TRIzol Reagent【加入TRIzol前不要清洗细胞,否则会增加mRNA降解的可能性】。用枪吹打几次或适当涡旋,使其充分裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,使其完全裂解。

    【注意】:样本体积不要超过加入TRIzol体积的10%。

     

    3.2 特殊样本处理【可选】:对于某些富含蛋白,多糖或脂肪的样本,经TRIzol Reagent裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物出现。此时需12,000g 4℃离心10min,之后吸取澄清的上清液至一新的离心管中。

    3.3 室温孵育5min,使得核蛋白体完全分解。

    3.4 按照每1ml TRIzol Reagent加入0.2ml 氯仿,盖紧盖子。涡旋混匀或用手剧烈晃动15s,室温孵育2~3min。

    3.5 于12,000g 4℃离心15min。离心后混合物分为三层:下层酚-氯仿层,中间层,和上层无色的水相层。RNA无一例外的停留在水相层中。水相层的容量约为所加TRIzol Reagent体积的60%。用枪吸取上层无色水相到一新的离心管中,避免吸到任何中间层或下层成分。

    【注意】:如果希望分离DNA和蛋白,请保留中间层和有机层。

     

    4.      RNA分离

    4.1    RNA的沉淀:a)【可选】如果起始样本量比较少(<106个细胞或<10mg组织),加入5-10μg RNase-free的糖原作为核酸助沉剂到水相中。b)按每ml起初TRIzol Reagent加入0.5ml异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10min。如果希望提取microRNA等小RNA,推荐-70℃沉淀过夜。c)于12,000g 4℃离心10min,在管底可见RNA沉淀,弃上清。



    4.2    RNA的清洗:a)按每ml起初TRIzol Reagent加入1ml 75%乙醇重悬沉淀?!咀ⅲ篟NA在75%乙醇中-20℃至少保存1年,4℃至少1周】;b)低速漩涡或颠倒混匀,于7,500g 4℃离心5min,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1秒),小心吸尽液体。c)操作的最后,简单干燥RNA沉淀(空气干燥或真空干燥5~10min)。不要在真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是,不能让RNA沉淀完全干燥,否则会极大的降低其可溶性。部分溶解的RNA样本的A260/A280比值<1.6。

    4.3    RNA的溶解:用20~50μl 无RNases水或含0.5% SDS的无RNases水溶解RNA,用枪上下吹打2~3次,使其充分溶解,置于-70℃保存或直接用于后续实验,如果后续要做酶切反应请勿用SDS。

    【注意】:对于肝脏、胰腺、肾脏等RNase含量较高的组织,沉淀可用100%去离子甲酰胺(货号:MS5515-50ML)溶解。

     

    5.      RNA产量的测定

    5.1    用无RNase水稀释RNA,之后测定在260nm和280nm的吸收值。

    5.2    使用公式A260×稀释倍数×40= μg RNA/ml。

    5.3    计算A260/A280比值,比值在1.8~2.0之间视为纯度较高,浓度>4 μg/ml的样品适用于分光光度计测定。

    5.4    进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。


    相关产品

    货号

    名称

    规格            

    MF0403-100ML     

    TRIzol Reagent总RNA抽提试剂

    100ml

    MF0404-500ML

    DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase )   

    500ml

    MF0406-100ML

    Surface RNase Remover固相RNase清除剂

    100ml

    MF0407-1.5ML

    Solution RNase Remover液相RNase清除剂

    1.5ml

    MF0409-50ML

    RNATector Stabilization Solution RNA稳定保存液

    50ml

    MF0410-100ML

    RNATector-ICE Frozen Tissue Transition Solution冰冻组织RNA稳定液

    100ml

    MF0412-1G

    Glycogen (5mg/ml)核酸助沉剂糖原(5mg/ml)

    1ml

    MF0413-500UL

    Glycogen (20mg/ml)核酸助沉剂糖原(20mg/ml)

    500μl

    MF0416-100ML

    DNase/RNase-Free Water

    100ml

    MS5515-50ML

    Formamide Deionized去离子甲酰胺

    50ml


    附录1 常见问题与解决方案

    出现问题

    可能起因

    解决方案

    比预期产量低

    样本未充分匀浆或裂解

    降低起始样本量;剪切组织到更小块,确保组织完全浸泡到TRIzol Reagent以达到完全裂解。

    沉淀未完全溶解

    通过反复用枪吸取样品和在50~60℃加热样品的方式来增加溶解率

    样本被降解

    样本未及时处理或收集后未马上冻存

    样本必须在收集后马上处理或立即冻存

    溶液或使用管子未经RNase去除处理

    确保实验中所用到的耗材和溶液不受RNase污染

    样本制备物没有保存在适当温度下

    将RNA样本保存在-70℃。

    DNA污染

    吸取水相层时带入中间/有机相层

    不要尝试吸取离心分层后的所有水相层

    RNA A260/A280低

    在不足量的TRIzol Reagent内匀浆样品,RNA与蛋白质、DNA未完全分离

    加入足量的TRIzol Reagent到样本

    匀浆后样品未在室温放置5min,RNA与核蛋白未完全解离

    匀浆后样品需室温放置5min

    水相中混有有机相,带有蛋白质和DNA的污染

    不要尝试吸取离心分层后的所有水相层

    抽提得到的RNA沉淀未完全溶解

    RNA需要完全溶解

     

     

     — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

     

     

    上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。


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