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    MKBio Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)
    目录号 MP7501-100T 售价 562.00元
    规格 100T 运输温度 冰袋运输
    其他名称 Alkaline Phosphatase Activity Assay Kit 碱性磷酸酶活性检测试剂盒 保存温度 -20℃冻存
    CAS号 N/A 有效期 1年
    应用 ALP活性(定量) 订购数量
    产品简介:

    Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

     

    产品标签:

    Phosphatase, Alkaline碱性磷酸酶;ALP/AKP;对硝基苯酚磷酸盐(pNPP);偶氮偶联法;显色法(定量);染色法(定性);


    产品信息

    产品名称

    产品编号           

    规格           

    价格(元)  

    Alkaline Phosphatase Assay Kit (Colorimetric) 

    碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

    MP7501-100T

    100T

    562

    【温馨提示I】:碱性磷酸酶产品专题,了解更多相关产品资料;

    【温馨提示II】:见碱性磷酸酶染色试剂盒产品;

    【温馨提示III】:碱性磷酸酶活性检测试剂盒产品专题;

    【温馨提示IV】:见碱性磷酸酶常用生化底物及试剂盒产品;


    产品描述

    碱性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP/AP/AKP/ALKP/ALPase,EC 3.1.3.1),碱性条件下能催化磷酸单酯水解,常见底物有对硝基苯酚磷酸盐(pNPP)、磷酸苯酯、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸等。常见ALP包括肠道碱性磷酸酶(如小牛肠来源,calf intestinal)、胎盘碱性磷酸酶(placental alkaline phosphatase)、非组织特异性碱性磷酸酶(tissue-nonspecific isozyme, alkaline phosphatase)等。

    碱性磷酸酶(ALP)活性的变化与一系列生理和病理事件紧密关联,比如骨骼发育、骨骼相关疾病、妊娠相关疾病和炎症性肠?。╥nflammatory bowel diseases)等。正因如此,ALP被用作衡量生理特征或疾病的参照指标。另外,ALP活性检测在环境监测、食品质量控制等方面也呈现重要作用。如,干细胞如诱导多潜能干细胞iPS,ALP活性很高,则ALP常被用作iPS诱导成功的标志;分化的结肠癌细胞内ALP活性显著提高,则ALP常被当做结肠癌细胞分化程度的指标(定性/定量);血清中ALP水平提高,被称作高碱性磷酸酶血症,此症状被认为和恶性胆管阻塞、原发性胆管硬化、原发性硬化胆管炎、肝淋巴瘤和肝肉瘤等肝胆疾病密切相关;ALP是成骨细胞的副产物,血清中ALP活性升高和骨头发育密切关联;

    本试剂盒能对细胞或组织裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品内源性碱性磷酸酶活性进行检测。原理在于:对硝基苯酚磷酸盐(pNPP)是一种常用的碱性磷酸酶(ALP)显色底物,碱性条件下能被ALP催化生成对硝基酚(para-nitrophenol,p-nitrophenol),呈黄色产物,可在400-415nm检测到吸光度。产物黄色越深,代表ALP活性越高,反之则酶活性越低。则通过比色分析可定量检测ALP水平。

    本试剂盒可检测100个样品,包括标准品和空白对照。


    产品组成

    组分编号         

    组分名称                              

    规格                

    保存方式         

    MP7501-A

    pNPP显色底物

    2管

    -20℃避光保存

    MP7501-B

    检测缓冲液

    15 mL

    -20℃保存

    MP7501-C

    反应终止液

    12 mL

    -20℃保存

    MP7501-D

    对硝基苯酚标准品(10mM)

    100μl 

    -20℃避光保存


    保存与运输方法

    保存:-20℃冻存,1年稳定。

    运输:冰袋运输。


    注意事项

    1. 若希望进行酶活力的绝对定量,进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐孵育30min等较长时间,以减小操作过程中的时间误差。若样品中酶活性较高,则可预先适当稀释样品。

    2. 样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。

    3. 检测缓冲液和对硝基苯酚标准品对人体有害,请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性,请小心操作。

    4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    操作步骤

    1. 试剂准备:将所有试剂取出,恢复至室温待用。

    a) 显色底物溶液:取一管显色底物,溶解于2.5ml的检测缓冲液中,充分溶解和混匀,冰上放置。新鲜配制的显色底物溶液需在数小时(≤ 6h)内使用。

    b) 标准品工作液:取10μl 对硝基苯酚标准品(10mM),用检测缓冲液稀释至200μl ,使得终浓度为0.5mM。


    2. 样品准备

    a) 细胞或组织裂解液的准备:采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和组织,如有必要需进行适当匀浆,随后离心取上清,用于ALP活性检测?!咀⒁狻浚毫呀庖褐胁荒芎姿崦敢种萍?。样品可-80℃冻存,避免反复冻融。

    b) 血浆、血清和尿液的准备:血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照?!咀⒁狻浚貉票覆荒苡煤珽DTA和柠檬酸盐的抗凝管。尿液通常也可直接用于测定。上述样品可-80℃冻存,避免反复冻融。

    c) 样品的稀释:若样品中含有较高的ALP活性,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,也可以用试剂盒中的检测缓冲液进行稀释。若使用试剂盒内的检测缓冲液进行稀释,需注意保留足够的缓冲液用于该试剂盒的检测过程。


    3.加样

    参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和 40μl,样品通??梢灾苯蛹?0μl。如果样品中的ALP活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

                          

    空白对照(Blank)  

    标准品(Standard)   

    样品(Sample)  

    检测缓冲液

    50μl

    (100-x)μl

    (50-y) μl

    显色底物

    50μl

    50μl

    样品

    yμl

    标准品工作液

    xμl


    4. 混匀:用枪头轻轻吹打混匀,也可借助摇床进行混匀。
    5. 孵育:37℃孵育5-10min。(若待测样品中ALP活性较低时,可适当延长孵育时间至30min)

    6. 终止:每孔加入100μl反应终止液终止反应。此时,标准品或有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色。

    7. 检测:405nm处测定吸光度。如果不能测定405nm,也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定,可以在数小时内完成测定,所显现的黄色在数小时内稳定。

    8. 单位定义:

    碱性磷酸酶活性单位的定义:在pH9.8的二乙醇胺(DEA)缓冲液中,37℃条件下,每min水解pNPP显色底物产生1μM对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的ALP量定义为一个酶活力单位,也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘氨酸缓冲液中,25℃条件下,每min水解pNPP显色底物产生1μM对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的ALP量定义为一个酶活力单位,也被称作一个甘氨酸酶活力单位。一个甘氨酸酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。

    9. 结果分析:根据酶活性单位的定义,计算出样品中的碱性磷酸酶活性。 



    常见问题

    1.   说明书提及配制好的显色底物溶液需在6小时内使用完。试剂盒只提供了两管显色底物,是不是意味

    着只能做两次?

    回答:是的。显色底物以粉末形式提供,单次实验需取一管全部配成显色底物溶液,且需要在6小时内用完,不建议冻存后再使用。为了避免试剂盒浪费,请在累积足够的样本后再进行检测。


    2.   本试剂盒适用于细胞培养上清内碱性磷酸酶的检测吗?

    回答:不可以。本试剂盒常用于细胞裂解液的检测,不适合细胞培养上清的检测,因为上清内的酶量偏低,不足以被本试剂盒检测到,无法反映真实结果。


    3.   本试剂盒内提及合适的细胞和组织裂解液,有没有推荐的?

    回答:推荐使用我司的免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)(Cat#: MP1508-100ML)?;蜃孕信渲坪?.2% Triton X-100的PBS,TBS或生理盐水等适当溶液。裂解液内不能含任何磷酸酶抑制剂。


    4.   本试剂盒内的碱性磷酸酶活性如何计算所得?

    回答:根据标准曲线和待测样品的吸光值,可计算到样品中对硝基苯酚(p-Nitrophenol)生成量。再根据酶活性定义:将生成的对硝基苯酚摩尔量除以孵育时间,进行酶活计算。制作标准曲线时,可以将横坐标体积转换算成摩尔数,再绘制标准曲线,方便后续计算。根据标准曲线方程计算出生成的对硝基苯酚摩尔量除以37℃孵育的时间即得到酶活。


    相关产品

    货号

    名称

    规格

    MP1508-100ML    

    免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)

    100ml          

    MP7501-100T

    碱性磷酸酶检测试剂盒(显色法)

    100T

    MP7504-100ML

    碱性磷酸酶染色液(改良钙钴法)

    2×50ml

    MP7505-30ML

    碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

    3×10ml

     

    文献引用:

    Wang CH et al. Colorimetric logic gate for alkaline phosphatase based on copper (II)-based metal-organic frameworks with peroxidase-like activity. Analytica Chimica Acta Volume 1004, 3 April 2018, Pages 74-81


    Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit using p-nitrophenyl phosphate (pNPP) as aphosphatase substrate was purchased from MKbio Co. Ltd. (Shanghai, China).


     

    K
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    邮箱: sales@maokangbio.com
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